2024年1月18日，根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局2024年度醫(yī)療器械注冊審查指導(dǎo)原則制訂計(jì)劃的有關(guān)要求，國家藥監(jiān)局器審中心組織編制了《猴痘病毒核酸檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（征求意見稿)》，并面向社會公開征求意見。
2024年1月18日，根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局2024年度醫(yī)療器械注冊審查指導(dǎo)原則制訂計(jì)劃的有關(guān)要求，國家藥監(jiān)局器審中心組織編制了《猴痘病毒核酸檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（征求意見稿)》，并面向社會公開征求意見。
猴痘病毒核酸檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（征求意見稿）
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)醫(yī)療器械注冊申請人對猴痘病毒核酸檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門提供參考。
本指導(dǎo)原則是對猴痘病毒核酸檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。
本指導(dǎo)原則是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
本指導(dǎo)原則適用于采用實(shí)時熒光PCR法，對皮膚病變標(biāo)本（包括病變皮疹、痘皰表面和/或滲出物的拭子，痘皰液，痘皰表皮或痘痂等）、咽拭子、全血或血清樣本等樣本中的猴痘病毒核酸進(jìn)行體外定性檢測的試劑。
對于采用其他方法學(xué)的猴痘病毒核酸檢測試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，申請人應(yīng)參照本指導(dǎo)原則，根據(jù)產(chǎn)品特性對適用部分進(jìn)行評價，并補(bǔ)充其他的評價資料。
本指導(dǎo)原則適用于猴痘病毒核酸檢測試劑注冊申請和變更注冊申請的情形。本指導(dǎo)原則針對猴痘病毒核酸檢測試劑注冊申報(bào)資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等相關(guān)法規(guī)要求，同時建議參考《定性檢測試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則》等適用的技術(shù)文件要求。
二、注冊審查要點(diǎn)
（一）監(jiān)管信息
1.產(chǎn)品名稱及分類編碼
產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如猴痘病毒核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。
2.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。
（二）綜述資料
綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。應(yīng)詳細(xì)說明產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理及檢測流程。提供不同適用機(jī)型的檢測通量，即一次檢測最多可檢測的樣本數(shù)。提供核酸提取（手工和自動提取方式應(yīng)分別明確）和PCR擴(kuò)增的時間，以及檢測全過程所需的時間。不同檢測流程，分別提供最少和最多檢測樣本量下的檢測時間。與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較，比較內(nèi)容包括樣本類型，檢測原理，檢測靶基因，組成成分，內(nèi)標(biāo)，質(zhì)控品，判讀規(guī)則，分析性能和臨床性能等。
預(yù)期用途中明確產(chǎn)品檢測的靶基因，需選擇保守性和特異性相對較高的基因，同時還應(yīng)考慮基因的擴(kuò)增效率。檢測基因的選擇應(yīng)提供相關(guān)指南或文獻(xiàn)，并分析所檢測基因的靈敏度和特異性是否符合臨床需求。
（三）非臨床資料
1.分析性能研究
注冊申請人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗(yàn)方案、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。
分析性能評估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來源、樣本類型、采集和處理方式、稀釋方式、定值過程及數(shù)據(jù)等。研究中采用的猴痘病毒陽性樣本，應(yīng)采用科學(xué)合理的方法確定其陰陽性和濃度水平，提交具體的試驗(yàn)資料。分析性能評估用樣本一般應(yīng)為真實(shí)樣本，可采用境內(nèi)外樣本進(jìn)行研究。如涉及稀釋后檢測，應(yīng)采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)。不可采用質(zhì)粒、假病毒等，進(jìn)行分析性能評估。對于各項(xiàng)性能中采用的樣本，在下述各項(xiàng)性能研究資料中分別提供樣本信息列表。精密度、檢出限和包容性研究中所用樣本應(yīng)相互獨(dú)立。
1.1樣本穩(wěn)定性
對采集后各階段的樣本進(jìn)行穩(wěn)定性研究，包括不同保存液、裂解液，不同滅活方式處理后的樣本，研究內(nèi)容包括冷藏保存時間，冷凍保存時間，凍融次數(shù)等。
建議對每種樣本類型均進(jìn)行穩(wěn)定性研究，研究樣本應(yīng)至少包含弱陽性和陰性樣本。
如核酸提取液可不立即進(jìn)行檢測，還需對核酸提取液的保存條件和穩(wěn)定性進(jìn)行研究。
1.2適用的樣本類型
列明產(chǎn)品適用的樣本類型，如皮膚病變標(biāo)本（包括病變皮疹、痘皰表面和/或滲出物的拭子，痘皰液，痘皰表皮或痘痂等）、咽拭子、全血或血清樣本，應(yīng)分別進(jìn)行分析性能評估。
1.3企業(yè)參考品驗(yàn)證（如適用）
根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
1.4準(zhǔn)確度
可采用方法學(xué)比對或參考品（盤）檢測的方法進(jìn)行研究。
1.5精密度
應(yīng)對精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。應(yīng)考慮運(yùn)行、時間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評價。精密度評價試驗(yàn)應(yīng)包含核酸提取步驟。設(shè)定合理的精密度評價周期，例如為期至少20天的檢測。對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，獲得重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室間精密度、批間精密度等結(jié)果。
采用臨床樣本或病毒培養(yǎng)物進(jìn)行精密度評價，應(yīng)至少包含3個水平：陰性樣本、臨界陽性樣本、中/強(qiáng)陽性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫螅纾?/p>
陰性樣本：不含待測物，陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。
臨界陽性樣本：待測物濃度略高于試劑盒的檢出限，陽性檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）。
中/強(qiáng)陽性樣本：待測物濃度呈中度到強(qiáng)陽性，陽性檢出率為100%且Ct值的CV≤5%（n≥20）。
1.6包容性
1.6.1采用生物信息學(xué)方法對產(chǎn)品檢測的包容性進(jìn)行研究，研究應(yīng)覆蓋權(quán)威數(shù)據(jù)庫中已公布的猴痘病毒核酸序列。
1.6.2驗(yàn)證具有時間和區(qū)域特征性的至少10個不同來源的陽性樣本，包含分支 I、分支 II和重點(diǎn)亞分支及變異株。研究應(yīng)包括檢出限和重復(fù)性的驗(yàn)證。
1.7檢出限
1.7.1檢出限的確定
建議將不同來源的至少3個樣本系列稀釋于與適用樣本一致的基質(zhì)中，進(jìn)行檢出限的確定。每個濃度梯度重復(fù)檢測，記錄不同濃度檢出的結(jié)果，采用適當(dāng)?shù)哪Ｐ停ㄈ鏟robit分析）和分析方法，將具有95%陽性檢出率的最低濃度水平作為確定的檢出限。申請人可采用數(shù)字PCR、標(biāo)準(zhǔn)曲線等方法進(jìn)行毒株核酸濃度的確認(rèn)，以copies/mL作為毒株濃度的表示方式。此外還可采用半數(shù)組織感染量測定法（TCID50）的方法進(jìn)行毒株濃度確認(rèn)，以TCID50/mL作為毒株濃度的表示方式。
1.7.2檢出限的驗(yàn)證
選擇另外3例不同來源的猴痘病毒樣本在檢出限濃度水平進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)達(dá)到95%陽性檢出率。
如檢測試劑包括多個檢測靶標(biāo)，應(yīng)分別進(jìn)行LOD研究。如采用毒株進(jìn)行LOD研究，應(yīng)將稀釋后毒株置于配套拭子上，以模擬實(shí)際檢測條件。
1.8分析特異性
1.8.1交叉反應(yīng)
生物信息學(xué)分析：采用生物信息學(xué)分析方法進(jìn)行研究，應(yīng)當(dāng)包括人基因組和所有已知病原體。
樣本驗(yàn)證：交叉反應(yīng)研究樣品除特殊說明外，應(yīng)采用滅活的臨床樣本或添加了滅活病原體培養(yǎng)物的陰性臨床樣本，樣本基質(zhì)應(yīng)與預(yù)期檢測樣本類型一致，交叉反應(yīng)研究用樣本主要考慮以下幾方面：
1.8.1.1其他近緣病毒：天花病毒（假病毒）、痘苗病毒、牛痘病毒、鼠痘病毒、傳染性軟疣病毒、特納河痘病毒（假病毒）、亞巴猴病毒（假病毒）等。
1.8.1.2引起出疹癥狀等的其他病原體：水痘-帶狀皰疹病毒、風(fēng)疹病毒、單純皰疹病毒-1/-2、人類皰疹病毒 6、人類皰疹病毒 7、人類皰疹病毒8、麻疹病毒、腸道病毒、梅毒螺旋體、登革病毒、人乳頭瘤病毒等。
1.8.1.3適用樣本中可能存在的其他細(xì)菌/真菌等：金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、綠膿桿菌、白色念珠菌、糞腸球菌、丙酸桿菌、類白喉?xiàng)U菌、銅綠假單胞菌、棒狀桿菌、大腸桿菌、生殖支原體、沙眼衣原體等。
1.8.1.4高濃度人類基因組DNA。
注：病毒培養(yǎng)液的濃度單位可采用TCID50或PFU/mL，細(xì)菌培養(yǎng)物濃度單位可采用CFU/mL。建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。通常，細(xì)菌感染的水平為106 CFU/mL或更高，病毒為105 PFU/mL或更高。也可采用其他合理方法定值的濃度，例如核酸濃度107 copies/mL，如病原體樣本或培養(yǎng)物不能符合上述要求，申請人應(yīng)詳細(xì)說明理由。對于某些難以培養(yǎng)或因?yàn)樯锇踩詿o法培養(yǎng)的病原體，可采用病原體核酸樣本進(jìn)行交叉驗(yàn)證。應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體核酸的來源、組成和濃度等信息，濃度可采用copies/mL單位表示。
申請人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒和細(xì)菌的來源、種屬/型別信息和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。
1.8.2干擾試驗(yàn)
1.8.2.1內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾
應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對可能存在的內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證推薦物質(zhì)見表1。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行試驗(yàn)，檢測包含臨界陽性水平在內(nèi)的猴痘病毒樣本。對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)分析，對比添加干擾物質(zhì)前后的 Ct 值差異。檢測的潛在干擾物包括樣本中的原有物質(zhì)及在樣本采集和處理期間引入的物質(zhì)。
1.8.2.2病原體干擾
申請人應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品適用的樣本類型，充分考慮臨床上容易與猴痘病毒合并感染的病原體及“1.8.1”部分經(jīng)生物信息學(xué)分析顯示存在較高同源性的病原體，在高濃度的情況下對低濃度（例如檢出限濃度）猴痘病毒核酸檢測的影響，進(jìn)行易合并感染病原體的干擾研究。申請人也可結(jié)合臨床應(yīng)用風(fēng)險(xiǎn)（如發(fā)病率），對較高同源性的病原體對檢測試劑可能存在的干擾進(jìn)行分析。
1.9核酸提取/純化性能
對配合使用的所有核酸提取試劑進(jìn)行提取核酸純度、濃度、提取效率的研究，并與質(zhì)量較好的核酸提取試劑進(jìn)行平行比對。若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測試劑至少進(jìn)行抗干擾、再現(xiàn)性和檢出限的驗(yàn)證，如果配套核酸提取試劑提取原理存在差異，還需額外進(jìn)行檢出限的建立。
1.10反應(yīng)體系
1.10.1樣本采集和處理
根據(jù)適用樣本類型，進(jìn)行樣本采集研究。提供樣本采集器具和保存液等的詳細(xì)研究資料，明確保存液或裂解液等的成分、濃度、使用量的要求等。配套的不同保存液或裂解液需驗(yàn)證檢出限和重復(fù)性。
提供樣本滅活、處理方式、處理過程的研究。
1.10.2核酸提取和反應(yīng)體系
研究確定最佳核酸提取和反應(yīng)體系，包括核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時間、循環(huán)數(shù)等。建議在保證核酸提取質(zhì)量的情況下盡量擴(kuò)大總反應(yīng)體系和加樣量，以提高檢測靈敏度。
提交不同適用機(jī)型基線和閾值循環(huán)數(shù)的確定資料。
不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。
2.穩(wěn)定性研究
申報(bào)試劑的穩(wěn)定性主要包括實(shí)時穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性（如適用）及凍融次數(shù)限制等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)論。對于實(shí)時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批產(chǎn)品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。對于開瓶穩(wěn)定性研究應(yīng)模擬真實(shí)使用情形，包括開瓶穩(wěn)定性的開瓶頻次和開瓶時間等。
3.陽性判斷值研究
陽性判斷值一般為申報(bào)產(chǎn)品檢測病毒核酸陽性的Ct值。陽性判斷值研究用樣本來源應(yīng)具有多樣性和代表性，考慮不同時間、地域、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素，盡量納入較多弱陽性的樣本，陰性樣本應(yīng)包含易交叉病原體高濃度樣本。在條件允許的情況下，建議覆蓋目前的流行株進(jìn)行陽性判斷值研究。如判定值存在灰區(qū)，應(yīng)提供灰區(qū)的確認(rèn)資料。
如果產(chǎn)品適用不同樣本類型，需要對各樣本類型進(jìn)行陽性判斷值的驗(yàn)證。
提交陽性判斷值研究所用樣本的背景信息列表，至少包括性別、年齡、臨床診斷信息、樣本來源機(jī)構(gòu)、檢測結(jié)果等信息。
提供內(nèi)標(biāo)檢測結(jié)果范圍的確定方法和研究資料。
4. 其他資料
4.1主要原材料研究資料
該類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分（如有）、質(zhì)控品、企業(yè)參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料、質(zhì)控品的定值試驗(yàn)資料等。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過程；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對比篩選試驗(yàn)資料、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗(yàn)報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。供應(yīng)商應(yīng)固定，不得隨意更換。
4.1.1引物和探針：應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則，提供引物、探針核酸序列、靶序列的基因位點(diǎn)及兩者的對應(yīng)情況。建議每種病毒設(shè)計(jì)兩套或多套引物、探針以供篩選，通過序列比對和功能性試驗(yàn)等方式，對病毒進(jìn)行包容性和特異性（如交叉反應(yīng)）的評價，其中序列比對包括與已公布猴痘病毒序列的比對，及與易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體的序列比對；功能性試驗(yàn)包括對不同來源、不同滴度的猴痘病毒核酸陽性樣本，和不同的近緣病原體的檢測。通過篩選確定最佳的引物和探針組合。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括序列準(zhǔn)確性、純度、濃度及功能性試驗(yàn)等。
4.1.2脫氧三磷酸核苷（dNTP）：包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP，應(yīng)提供對其純度、濃度、功能性等的詳細(xì)驗(yàn)證資料。
4.1.3酶：需要的酶主要包括DNA聚合酶、尿嘧啶DNA糖基化酶等，應(yīng)分別對酶活性、功能性等進(jìn)行評價和驗(yàn)證。
4.1.4質(zhì)控品
試劑盒一般包含陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品。陽性質(zhì)控品應(yīng)包含試劑盒檢測的靶序列，可采用假病毒或質(zhì)粒制備。質(zhì)控品需參與樣本處理、核酸的平行提取和檢測的全過程，以對整個提取和PCR擴(kuò)增過程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)量控制。提交試劑盒質(zhì)控品有關(guān)原料選擇、制備、定值過程、濃度范圍等試驗(yàn)資料，對質(zhì)控品的檢測結(jié)果Ct值范圍做出明確的要求。
4.1.5內(nèi)標(biāo)
內(nèi)標(biāo)，又稱內(nèi)對照，可對管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，應(yīng)與靶核酸一同提取及擴(kuò)增。申請人需對內(nèi)標(biāo)的引物、探針設(shè)計(jì)和相關(guān)反應(yīng)體系的濃度做精確驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽性曲線又要盡量降低對靶基因檢測造成的抑制。明確內(nèi)標(biāo)的檢測結(jié)果Ct值范圍。建議科學(xué)設(shè)置內(nèi)標(biāo)，對待測樣本的取樣質(zhì)量、試劑的反應(yīng)體系進(jìn)行監(jiān)控。
4.1.6企業(yè)參考品
該類產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和精密度參考品。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際需要設(shè)置企業(yè)參考品。
應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗(yàn)證資料。企業(yè)參考品應(yīng)采用臨床樣本，或者使用病毒培養(yǎng)物加入陰性基質(zhì)。企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：
陽性參考品：應(yīng)著重考慮不同來源的病毒樣本和濃度要求，應(yīng)至少選取不同來源的5個病毒樣本。
陰性參考品：主要涉及對交叉反應(yīng)的驗(yàn)證情況，建議包括水痘-帶狀皰疹病毒、風(fēng)疹病毒、單純皰疹病毒、人類皰疹病毒、天花病毒（假病毒）、痘苗病毒、牛痘病毒、化膿性鏈球菌、白色念珠菌等。
檢出限參考品：可采用95%陽性檢出水平或略高于檢出限的水平，如100%陽性檢出水平。
精密度參考品：建議包括高、低兩個濃度的樣本，其中一個濃度應(yīng)為檢出限附近的濃度。
4.2生產(chǎn)工藝研究資料
介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，可用流程圖結(jié)合文字的方式表述。提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。
（四）臨床評價資料
臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。
1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)
建議申請人在相關(guān)流行病學(xué)多發(fā)區(qū)域選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，應(yīng)是經(jīng)備案的醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)（包括各級疾病預(yù)防控制中心）。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量應(yīng)不少于3家，且具有分子生物學(xué)方法檢測的優(yōu)勢，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實(shí)驗(yàn)中，試驗(yàn)體外診斷試劑和對比方法均應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。
2.臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)
2.1 與對比方法/試劑的比較研究
2.1.1申請人可采用核酸序列測定方法作為參比方法，驗(yàn)證試驗(yàn)體外診斷試劑檢測結(jié)果與核酸序列測定（測序）結(jié)果之間的一致性。臨床研究中應(yīng)對選用的測序方法做詳細(xì)介紹，并對委托測序服務(wù)的機(jī)構(gòu)（如涉及）資質(zhì)和選擇依據(jù)作簡要說明或提供相關(guān)資料。
同時申請人應(yīng)進(jìn)行部分與病毒分離培養(yǎng)鑒定進(jìn)行比對的臨床試驗(yàn)。
2.1.2 如有已上市同類產(chǎn)品，臨床試驗(yàn)可選擇已上市的同類產(chǎn)品作為對比試劑，對比試劑的選擇應(yīng)考慮樣本類型、產(chǎn)品性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)體外診斷試劑具有良好的可比性。
2.2 與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較研究
除上述比對試驗(yàn)外，還應(yīng)考慮試驗(yàn)體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對比。臨床參考標(biāo)準(zhǔn)即按照國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術(shù)指南》等文件進(jìn)行病例診斷的方法。
3.臨床試驗(yàn)入組人群
臨床試驗(yàn)的入組人群應(yīng)為產(chǎn)品的預(yù)期適用人群，該產(chǎn)品的適用人群為猴痘的疑似病例，申請人在進(jìn)行臨床試驗(yàn)時應(yīng)依據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《猴痘診療指南》中對“疑似病例”的定義，按照該定義入組病例進(jìn)行臨床研究。同時還應(yīng)入組部分需要進(jìn)行鑒別診斷的其它發(fā)熱出疹性疾病，如水痘、帶狀皰疹、單純皰疹、麻疹、登革熱等進(jìn)行特異性的評價。如試驗(yàn)體外診斷試劑包括血液樣本類型，應(yīng)注意針對該樣本類型，入組人群應(yīng)為急性期發(fā)病7日內(nèi)的病例。
4.臨床試驗(yàn)樣本類型
臨床樣本的采集建議按照《猴痘病毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)指南》進(jìn)行。
如申報(bào)產(chǎn)品適用于不同的樣本類型，如皮膚病變標(biāo)本（包括病變皮疹、痘皰表面和/或滲出物的拭子；痘皰液；皮疹或痘皰表皮、皮疹內(nèi)液體拭子；痘痂或硬皮等）、咽拭子、全血或血清樣本，應(yīng)在臨床試驗(yàn)中分別進(jìn)行臨床評價。針對全血和血清兩種樣本類型，申請人可通過同源比對的方式進(jìn)行評價。樣本類型的選擇，應(yīng)參考國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術(shù)指南》等文件的相關(guān)要求。
5.臨床試驗(yàn)樣本量
與對比方法/試劑比較研究的臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。臨床試驗(yàn)可依據(jù)試驗(yàn)用體外診斷試劑相對于對比方法的陰陽性符合率分別估算最低陰陽性樣本例數(shù)。
其中，陰陽性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議不低于90%。獲得臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)后，證明產(chǎn)品相對于對比方法的陰陽性符合率（置信區(qū)間下限）不低于預(yù)設(shè)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）。當(dāng)評價指標(biāo)P接近100%時，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，如精確概率法等。
如申報(bào)試劑包含不同樣本類型，建議針對皮膚病變標(biāo)本、咽拭子、血液樣本分別按照上述方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)估算。應(yīng)注意每種皮膚病變標(biāo)本均應(yīng)有一定陽性例數(shù)。其中皮疹/痘皰表面拭子可能陽性檢出率較低，如臨床試驗(yàn)中未能入組到充分的陽性例數(shù)，建議在說明書中對于該樣本類型的局限性進(jìn)行提示。
病毒分離培養(yǎng)應(yīng)入組一定數(shù)量的陽性及陰性病例，考察試驗(yàn)體外診斷試劑與病毒分離培養(yǎng)結(jié)果的一致性，納入的例數(shù)也應(yīng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)估算，可采用抽樣精度的公式進(jìn)行樣本量估算。
與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較研究，建議參考與對比方法/試劑比較研究部分的樣本量估算方法，設(shè)定合理的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)。
6.臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析
此類產(chǎn)品的臨床試驗(yàn)?zāi)康脑谟隍?yàn)證試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品及臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的一致性，統(tǒng)計(jì)分析一般以四格表的形式對結(jié)果進(jìn)行總結(jié)，并據(jù)此計(jì)算試驗(yàn)體外診斷試劑與對比方法的陽性/陰性符合率、臨床靈敏度、臨床特異度及其置信區(qū)間。應(yīng)將試驗(yàn)體外診斷試劑與對比方法檢測結(jié)果一致性、試驗(yàn)體外診斷試劑檢測結(jié)果與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的一致性、試驗(yàn)體外診斷試劑檢測結(jié)果與病毒分離培養(yǎng)鑒定結(jié)果的一致性分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以評價產(chǎn)品臨床性能。
臨床試驗(yàn)建議對入組人群的人口學(xué)進(jìn)行分析，包括年齡、性別、臨床診斷背景等。臨床試驗(yàn)中包含不同樣本類型的，應(yīng)在總體統(tǒng)計(jì)分析的基礎(chǔ)上，每個樣本類型分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
臨床試驗(yàn)中所有不一致結(jié)果均應(yīng)結(jié)合患者的流行病學(xué)背景、臨床癥狀、疾病轉(zhuǎn)歸等信息進(jìn)行充分的分析。
7. 境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的認(rèn)可
境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)符合《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》和《使用體外診斷試劑境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的注冊審查指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求。提交完整的臨床試驗(yàn)方案、報(bào)告和倫理審查意見，以及該數(shù)據(jù)適用于中國患者人群的論證資料、境內(nèi)外臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理差異的對比資料和臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理差異對于臨床試驗(yàn)結(jié)果影響的論證資料。
注冊申請人應(yīng)根據(jù)上述臨床試驗(yàn)技術(shù)審評要求，論證境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的充分性。
8. 臨床證據(jù)的形式要求
申請人應(yīng)按照《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》、《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等法規(guī)文件要求提交各機(jī)構(gòu)倫理審查意見、臨床試驗(yàn)方案、臨床試驗(yàn)小結(jié)、臨床試驗(yàn)報(bào)告以及臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)庫。
臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)匯總表作為臨床試驗(yàn)報(bào)告的附件提交。數(shù)據(jù)表中應(yīng)包括檢測病例的編號、年齡、性別、樣本類型、臨床診斷結(jié)果、發(fā)病時間、試驗(yàn)體外診斷試劑檢測結(jié)果（含各基因的Ct值）、對比方法的檢測結(jié)果（各基因的Ct值）等，如臨床試驗(yàn)中所用樣本為核酸提取液，應(yīng)明確該樣本樣本保存液（如涉及）、核酸提取試劑等。臨床應(yīng)用的數(shù)據(jù)集中每一病例編號應(yīng)能夠溯源。
關(guān)于測序試驗(yàn)，申請人應(yīng)提供以下關(guān)于測序部分的詳細(xì)試驗(yàn)資料，需有臨床試驗(yàn)單位的簽章確認(rèn)。
（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿
產(chǎn)品說明書格式應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。猴痘病毒核酸檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。
1．【預(yù)期用途】
本試劑盒用于體外定性檢測猴痘疑似病例、其他需要進(jìn)行猴痘病毒感染診斷或鑒別診斷者的xx樣本中猴痘病毒核酸。
有關(guān)“疑似病例”等人群的定義參照《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術(shù)指南》等文件執(zhí)行。
該產(chǎn)品在使用上應(yīng)當(dāng)遵守《猴痘診療指南》及《猴痘防控技術(shù)指南》等文件的相關(guān)要求。
開展猴痘病毒核酸檢測，應(yīng)符合《猴痘病毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)指南》等的要求，做好生物安全工作。
本試劑盒檢測結(jié)果僅供臨床參考，不得作為臨床診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)。建議結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢測對病情進(jìn)行綜合分析。
2.【檢驗(yàn)原理】
簡述產(chǎn)品的核酸提取和擴(kuò)增原理，檢測能夠覆蓋的目標(biāo)基因序列特征。明確內(nèi)標(biāo)基因名稱及其作用。如采用了防污染措施，進(jìn)行簡要描述。
3.【主要組成成分】
明確試劑盒中各組分及具體成分。明確需要但未提供的材料，例如核酸提取試劑，病毒保存液等的產(chǎn)品名稱，生產(chǎn)廠家，貨號及注冊證號、備案號等信息。
4.【樣本要求】
需詳細(xì)描述樣本采集和處理方式，包括采樣步驟，適用的拭子材質(zhì)（如適用），保存液及使用體積、適用的抗凝劑類型（如適用），滅活方式等。描述樣本及核酸提取液的保存穩(wěn)定性。
5.【檢驗(yàn)方法】
明確核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積，陰、陽性質(zhì)控品與待測樣本同步進(jìn)行核酸提取操作。明確各適用機(jī)型的反應(yīng)參數(shù)設(shè)置。明確質(zhì)控品和內(nèi)標(biāo)的檢測結(jié)果Ct值范圍，作為實(shí)驗(yàn)有效性的標(biāo)準(zhǔn)。
6.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
通過擴(kuò)增曲線和Ct值進(jìn)行結(jié)果陰陽性的判斷，列明結(jié)果陰性、陽性、復(fù)測、無效等所有情形。
7.【檢驗(yàn)方法的局限性】
7.1本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。
7.2有關(guān)假陽性結(jié)果的可能性分析
7.2.1 如果樣本在運(yùn)輸、處理過程中發(fā)生交叉污染，則可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
7.2.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境有PCR產(chǎn)物等氣溶膠污染，則可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
7.2.3 實(shí)驗(yàn)過程中使用的耗材、設(shè)備等受污染，則可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
7.3有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析
7.3.1不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲存及處理、樣本中病原體含量過低均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
7.3.2該病原體待測靶序列的變異或其他原因?qū)е碌男蛄懈淖兛赡軙?dǎo)致假陰性結(jié)果；
7.3.3 未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會導(dǎo)致假陰性結(jié)果。
8.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
簡述以下性能指標(biāo)：
8.1國家標(biāo)準(zhǔn)品（如有）和企業(yè)參考品的符合率。
8.2檢出限：簡要介紹評價方法、所用樣本情況以及評價結(jié)果。
8.3對包容性的研究情況進(jìn)行總結(jié)。包括不同分支樣本和猴痘病毒變異株的檢出限和重復(fù)性性能并描述猴痘病毒變異株生物信息學(xué)分析結(jié)果。
8.4對精密度的研究情況進(jìn)行總結(jié)。
8.5分析特異性
8.5.1交叉反應(yīng)：詳述交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類，及有/無交叉反應(yīng)的濃度水平。
8.5.2干擾試驗(yàn)：說明驗(yàn)證的干擾物質(zhì)種類及有/無干擾反應(yīng)的濃度水平。
8.6臨床試驗(yàn)：簡要介紹試驗(yàn)方法、受試者及樣本、試驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論等。
9.【注意事項(xiàng)】
9.1本產(chǎn)品僅用于體外診斷。
9.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室要求。
9.3試劑保存運(yùn)輸及使用過程中多種因素可能導(dǎo)致性能變化，如保存運(yùn)輸不當(dāng)、樣本采集、樣本處理及檢測過程操作不規(guī)范等，請嚴(yán)格按照說明書操作。因拭子等樣本采集過程及病毒感染過程本身的特點(diǎn)，可能存在采集到的樣本量不足等原因帶來的假陰性結(jié)果，應(yīng)結(jié)合臨床其他診療信息綜合判斷，必要時復(fù)測。
9.4生物安全防護(hù)相關(guān)內(nèi)容
9.5避免實(shí)驗(yàn)室污染的措施
三、參考文獻(xiàn)
1.《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場監(jiān)督管理總局令第48號）[Z].
2.《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號）[Z].
3.中華人民共和國衛(wèi)生健康委員會.猴痘診療指南(2022年版)[Z]2022-06-10
4. 中華人民共和國衛(wèi)生健康委員會. 猴痘防控技術(shù)指南(2022年版)[Z]2022-06-27
四、起草單位
國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心